耶魯大學(xué)陳斯迪、南京大學(xué)葉露鵬等在 Nature Biotechnology 期刊發(fā)表了題為：In vivo AAV–SB-CRISPR screens of tumor-infiltrating primary NK cells identify genetic checkpoints of CAR-NK therapy 的研究論文。
研究團(tuán)隊歷經(jīng)多年的技術(shù)攻關(guān)，利用AAV-轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將CRISPR文庫整合到基因組中，克服了原代NK細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因編輯效率低的障礙。研究通過四個平行的CRISPR篩選實(shí)驗(yàn)以及單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)了一個全新靶點(diǎn)——CALHM2，為NK細(xì)胞腫瘤免疫提供了新的治療靶點(diǎn)。
在這項研究中，研究團(tuán)隊利用AAV-轉(zhuǎn)座子技術(shù)高效整合CRISPR文庫到原代NK細(xì)胞基因組中，并在四種不同的腫瘤模型中進(jìn)行體內(nèi)高通量基因篩選。同時，團(tuán)隊利用單細(xì)胞RNA測序（scRNA-seq）描繪腫瘤浸潤NK細(xì)胞亞群和轉(zhuǎn)錄組圖譜。
值得注意的是，兩組實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了一個唯一共同的NK新靶點(diǎn)——CALHM2，敲除CALHM2的NK細(xì)胞具有更強(qiáng)的殺傷性和腫瘤浸潤能力，CALHM2的mRNA能夠逆轉(zhuǎn)CALHM2敲除的NK細(xì)胞的表型。在人原代NK細(xì)胞中，CALHM2敲除增強(qiáng)了它們的細(xì)胞毒性、脫顆粒和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在對CAR-NK細(xì)胞具有抵抗力的實(shí)體瘤模型中，CALHM2敲除的CAR-NK細(xì)胞在體內(nèi)顯示出強(qiáng)大的抗腫瘤效果。
總的來說，該研究發(fā)現(xiàn)了一個NK細(xì)胞的全新檢查點(diǎn)——CALHM2，并展示了通過敲除CALHM2來構(gòu)建增強(qiáng)型NK細(xì)胞療法的潛力。
