美國加州大學(xué)舊金山分校Alexander Marson等研究人員合作發(fā)現(xiàn)，堿基編輯誘變繪制出調(diào)整人類T細(xì)胞功能的等位基因圖譜。相關(guān)論文于近日在線發(fā)表于國際學(xué)術(shù)期刊《自然》。
研究人員開發(fā)了一個(gè)大規(guī)模堿基編輯誘變平臺，目的是精確定位編碼可調(diào)節(jié)原代人類T細(xì)胞活化反應(yīng)的氨基酸殘基的核苷酸。研究人員生成了一個(gè)包含約117000個(gè)單向?qū)?/span>RNA分子的文庫，將堿基編輯靶向385個(gè)與T細(xì)胞功能有關(guān)的基因的蛋白質(zhì)編碼位點(diǎn)，并系統(tǒng)地鑒定了調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化和細(xì)胞因子產(chǎn)生的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域和特定氨基酸殘基。研究人員發(fā)現(xiàn)了廣泛的等位基因，包括編碼PIK3CD、VAV1、LCP2、PLCG1和DGKZ等蛋白中關(guān)鍵殘基的變體，其中既有功能增益突變，也有功能喪失突變。研究人員驗(yàn)證了許多等位基因的功能效應(yīng)，并進(jìn)一步證明堿基編輯突變可以正反兩方面調(diào)節(jié)T細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能。
最后，通過使用對原間隔基序要求寬松的堿基編輯器（NG對NGG）進(jìn)行更高分辨率的篩選，研究人員發(fā)現(xiàn)了可用于調(diào)整T細(xì)胞功能的特定結(jié)構(gòu)域和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用位點(diǎn)。因此，原代免疫細(xì)胞中的堿基編輯篩選提供了生化見解，并有可能加速免疫療法的設(shè)計(jì)。
研究人員表示，CRISPR篩選技術(shù)是發(fā)現(xiàn)控制T細(xì)胞功能的基因的有力工具，并為免疫療法提名了候選靶標(biāo)。然而，還需要新的方法來探測關(guān)鍵基因中的特定核苷酸序列。在原代人類T細(xì)胞中進(jìn)行系統(tǒng)突變可以發(fā)現(xiàn)調(diào)整特定表型的等位基因。DNA堿基編輯器是高效引入靶向突變的強(qiáng)大工具。
